Selezione di microrganismi benefici - Prof. Aldo Corsetti - a.a. 2022/2023
ATTENZIONE: i contenuti di questo corso sono relativi all'anno accademico 2022/2023
Topic outline
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Il corso, dopo aver tracciato una panoramica sull'ecologia microbica del corpo umano, definisce gli aspetti fondamentali relativi alla identificazione, tipizzazione molecolare e selezione di microrganismi utili per la salute dell'uomo e per la produzione di alimenti fermentati. Tratta, inoltre, delle caratteristiche distintive dei probiotici più diffusi e utilizzati come ingredienti alimentari e integratori.
Oltre alle lezioni frontali sono previste attività di laboratorio inerenti all'analisi microbiologica di alimenti e integratori contenenti probiotici, alla identificazione e tipizzazione molecolare fino a livello di ceppo e alla valutazione dei principali tratti di interesse di microrganismi probiotici e pro-tecnologici.
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Presentazione corso. Il concetto di simbiosi. Introduzione al microbiota umano.
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Descrizione del microbiota delle diverse parti del corpo umano (pelle, cavità orale, vie respiratorie, vagina, apparato gastro - intestinale)
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Impatto del microbiota intestinale sulla salute dell’ospite. Interazioni microbiota-ospite: descrizione dei MAMPs. Interazione MAMPs-PRRs e relativi effetti. Cenni a patogeni e fattori di virulenza (FV) e PAI. Differenza tra PAMPs e FV.
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Sistemi di tipizzazione molecolare basati sul sequenziamento del DNA
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Sistemi di tipizzazione molecolare basati su enzimi di restrizione. Cenni di genomica. Piattaforme per analisi in silico dei geni di virulenza e antibiotico resistenza.
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Probiotici e criteri di selezione. Alimenti fermentati.
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Food cultures. I principali probiotici: Lactobacillus spp.; Bifidobatteri; Bacillus spp.; Akkermansia muciniphila.
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ESERCITAZIONE 1: preparazione materiale per l'analisi microbiologia di prodotti contenenti probiotici (alimenti e integratori)
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ESERCITAZIONE 2: campionamento di prodotti probiotici a base latte; estrazione DNA e amplificazione e purificazione, dopo corsa elettroforetica, del gene 16S DNA.
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ESERCITAZIONE 3: Risultati conta vitale. Test fenotipi preliminari per candidati probiotici e identificazione tramite KIT API. Progettazione tipizzazione molecolare MLST e RAPD.
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ESERCITAZIONE 4: Risultati KIT API e verifica identificazione biotipo.
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ESERCITAZIONE 5: Valutazione resistenza passaggio GIT in vitro; saggio MTT con cellule intestinali
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ESERCITAZIONE 6: Adesione di cellule batteriche a cellule intestinali.
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ESERCITAZIONE 7: valutazione della capacità antiossidante di candidati probiotici tramite saggi DPPH, ABTS e FRAP.
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SEMINARIO: Extracellular vesicles